Auflösung von Polypeptiden
Jede Aminosäure hat inhärente chemische Eigenschaften und die Löslichkeit eines Peptids hängt von seiner Sequenz und Modifikationen ab. Wir empfehlen, eine kleine Menge des Peptids zur Prüfung der Löslichkeit einzunehmen, bevor alle Peptide aufgelöst werden.
Das Auflösen von Peptiden ist ein sehr wichtiger Schritt. Eine unsachgemäße Solubilisierung kann zum Peptidverlust oder zum Scheitern des Experiments führen. Die Löslichkeit von Peptiden hängt hauptsächlich von der Sequenz des Peptids ab. Achten Sie daher beim Design des Peptids darauf. Es wird empfohlen, dass die Peptidsequenz 20 % geladene Reste enthält, um ihre Löslichkeit zu erhöhen.
Vor der Verwendung können Kunden die folgenden drei Grundprinzipien befolgen, um ein geeignetes Lösungsmittel zum Auflösen des Peptids auszuwählen.
Erstens muss das gewählte Lösungsmittel in der Lage sein, das Peptid vollständig aufzulösen; Zweitens muss das gewählte Lösungsmittel mit den Versuchsbedingungen kompatibel sein; Schließlich darf das gewählte Lösungsmittel nicht mit dem Peptid reagieren oder es abbauen.
Solange es die Peptidmenge zulässt, können Sie zunächst einen kleinen Teil des Peptids und dann die gesamte Probe auflösen. Wenn Sie das Peptid aus einem Lösungsmittel zurückgewinnen müssen, können Sie ein Ausgangslösungsmittel wählen, das die Entfernung nach der Lyophilisierung erleichtert.
Die folgenden Vorschläge können Ihnen beim Auflösen von Peptiden helfen:
Peptide mit weniger als 5 Aminosäuren sind im Allgemeinen in wässrigen Lösungen löslich, stark hydrophobe Aminosäuren (W, I, L, F, M, V, Y) ausgenommen.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25 % geladene Aminosäuren (E, D, K, R, H) hydrophiler Peptide und enthaltend<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25 % geladene Aminosäuren können auch in Wasser unlöslich oder teilweise löslich sein. Es ist am besten, das Peptid zunächst in einer minimalen Menge eines starken organischen Lösungsmittels wie DMF, ACN, Isopropylalkohol, Ethanol, Essigsäure, 4–8 M GdnHCl, Harnstoff oder DMSO (nicht in der Reihenfolge C, W, M) und anderen ähnlichen organischen Lösungsmitteln aufzulösen. Am besten ist es, das organische Lösungsmittel, das das Peptid auflöst, langsam tropfenweise in die wässrige Lösung zu geben. Wenn die Lösung trübe wird, hat sie möglicherweise die Löslichkeitsgrenze erreicht und es hat keinen Sinn, sie weiter aufzulösen. Es ist zu beachten, dass das zunächst ausgewählte Lösungsmittel mit dem Versuchssystem kompatibel sein sollte.
Hydrophobic amino acid content >75 % Stark hydrophobe Peptide sind im Allgemeinen auch in wässrigen Lösungen unlöslich. Solche Peptide sollten ebenfalls zunächst mit starken organischen Lösungsmitteln (z. B. TFA, Ameisensäure) gelöst werden und können bei Zugabe zu einer wässrigen Lösung ebenfalls ausfallen. Die endgültige Peptidlösung erfordert möglicherweise hohe Konzentrationen an organischen Lösungsmitteln, um sie zu denaturieren, und organische Lösungsmittel werden im Allgemeinen nicht für biologische Funktionsstudien in lebenden Zellen verwendet.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75 %) Polypeptidsequenzen neigen dazu, redundante intermolekulare Wasserstoffbindungsnetzwerke zu bilden und bilden in konzentrierten wässrigen Lösungen leicht Gele. Solche Peptide können wie in Schritt 3 beschrieben solubilisiert werden. Um mögliche Probleme bei der Auflösung zu reduzieren, wird empfohlen, dass Kunden dem Design und der Sequenz mehr Aufmerksamkeit schenken, um die Löslichkeit des Peptids zu verbessern.