Schritte der Peptidsynthese

Wiegen Sie 2,0 g leeres Wang-Harz in ein sauberes und trockenes Reaktionsgefäß, geben Sie 15 ml DMF hinzu und aktivieren Sie es bei Raumtemperatur etwa 30 Minuten lang.

Filtern Sie bei Raumtemperatur das Lösungsmittel aus dem vorherigen Schritt durch einen Sandkern heraus und geben Sie 1 mmol 5 molaren Überschuss an C hinzu. Erste Aminosäure am Ende, 5-facher molarer Überschuss an DMAP, 5 molaren Überschuss an DIC, DMF. Führen Sie die Reaktion des Lösungsmittels bei Raumtemperatur 3 Stunden lang durch. Nach Abschluss der Reaktion verwenden. DMF 4–6 Mal waschen, jeweils 5–6 Mal ml. Anschließend eine entsprechende Menge Pyridin und Essigsäureanhydrid im Volumenverhältnis 1:1 zugeben und 30 Minuten reagieren lassen. Nach Abschluss der Reaktion verwenden. DMF 4–6 Mal waschen, jeweils 5–6 Mal ml. (Effekt: Blockiert die aktiven Mikropunkte auf dem unreaktiven leeren Harz.)

Entfernen Sie das Lösungsmittel aus dem vorherigen Schritt durch Saugfiltration und geben Sie 10 ml 20 % Piperidin-DMF hinzu. Die Lösung wird zum Harz gegeben, N2. Rühren Sie 10 Minuten. Zum Schluss filtrieren Sie die Lösung und geben Sie 10 ml 20 % Piperidin-DMF-Lösung, N2, hinzu. Blasen und rühren Sie 5 Minuten lang. Filtern Sie dann die Lösung heraus und wiederholen Sie diesen Vorgang zweimal. DMF 4 Mal waschen, 2 Mal mit Methanol waschen, jeweils 5–6 Mal ml.

Nehmen Sie eine kleine Menge Harz heraus, waschen Sie es dreimal mit Methanol, geben Sie Ninhydrin, KCN und jeweils einen Tropfen Phenollösung hinzu, 105–110 Grad. Erhitzen für 5 Minuten. Dunkelblau wird eine positive Reaktion, was anzeigt, dass die Entfernung abgeschlossen ist und der nächste Schritt der Reaktion durchgeführt werden kann.; Wenn es farblos ist, bedeutet dies, dass die Schutzgruppe nicht vollständig entfernt wurde und der obige Entschützungsvorgang wiederholt werden muss.

Wiegen Sie den 3-fachen molaren Überschuss an C ab. Die zweite Aminosäure am Ende, einen 3-fachen molaren Überschuss an HBTU und einen 3-fachen molaren Überschuss an HOBT. Geben Sie in das Reaktionsgefäß die entsprechende Menge DMF hinzu. Nachdem sich die Lösung vollständig aufgelöst hat, geben Sie einen 10-fachen molaren Überschuss (reines) DIEA hinzu. Reaktion bei Raumtemperatur 40 Minuten lang, 4–6 Mal mit DMF waschen, jeweils 5–6 Mal ml. Nehmen Sie eine kleine Menge Harz, verwenden Sie einen Test mit Ninhydrin-Nachweisreagenz und es erscheint farblos. Fügen Sie dann 10 ml 20 % Piperidin-DMF-Lösung zur Entfernung von Fmoc hinzu. Führen Sie dies zweimal für 10 Minuten und 5 Minuten durch. Nach der Verwendung waschen Sie DMF viermal und waschen Sie zweimal mit Methanol, jeweils 5-6 Mal ml. Nehmen Sie eine kleine Menge Harz heraus und verwenden Sie zum Nachweis das Ninhydrin-Nachweisreagenz. Wenn die Erkennung blau ist, können Sie mit dem nächsten Schritt der Reaktion fortfahren.

Zum Schluss verwenden Sie eine Trifluoressigsäure-Schneidlösung (95 % TFA:2 % TIS:2 % EDT:1 % H2O). Schneiden Sie 2 Stunden lang, filtrieren Sie die Reaktionslösung durch Absaugen und erhalten Sie eine Trifluoressigsäurelösung des Polypeptids. Trocknen Sie das Lysat so weit wie möglich mit Stickstoff, präzipitieren Sie es mit Ether, zentrifugieren Sie es und waschen Sie es dann 3 Sekunden lang mit Ether. Etwa 5 Mal wurde ein weißer Feststoff erhalten. Nach dem Auflösen in reinem Wasser HPLC entsalzen und reinigen, einfrieren-trocknen und Kristalle ausfällen, eine kleine Menge MS-Analyse entnehmen.