Zwei Methoden zur Abspaltung von Peptiden aus Festphasenharzen
Eine Methode zur Abspaltung von Polypeptiden aus Festphasenharzen
Festphase Fmoc Nach der chemischen Synthese von Peptiden gibt es viele Methoden zur Spaltung. Jetzt stellen wir zwei Grundtypen vor, die allgemein von allen verwendet werden.
1. Methode mit starker Säure (häufig verwendete TFA)
Geben Sie das trockene Harz in einen Schüttelkolben und geben Sie die entsprechende Menge an Scavenger (Scavengers), Spaltungsreagenz Trifluoressigsäure (TFA), 10–25 ml/g Harz, hinzu, decken Sie es ab und schütteln Sie es zwischendurch bei Raumtemperatur. Filtern Sie das Harz mit neuem TFA. Waschen Sie das Harz 2–3 Mal, kombinieren Sie das Filtrat und geben Sie tropfenweise das 8–10-fache Volumen Eisether hinzu. Manchmal kann ein Teil davon durch TFA abgedampft werden. Es wurde ein roher Peptidniederschlag erhalten. Diethylether kann mit Eis gekühlt werden, um die Fällungseffizienz zu verbessern. Sammeln Sie schließlich das ausgefällte Rohpeptid.
Anwendbares Harz:King-Harz oder Rink-Amid-Harz
2. Methode mit schwacher Säure (verdünnte TFA oder Essigsäure)
1 % TFA:
1 g Das hängende Polypeptid--Harz wurde zu einer Lösung mit 1 % TFA gegeben. Der Glasschüttelkolben der Dichlormethanlösung wurde verschlossen und 2 Minuten lang geschüttelt. Gießen Sie das Filtrat mit Stickstoff in einen anderen neuen Methanol-Schüttelkolben mit 10 % Pyridin. Wiederholen Sie den obigen Vorgang 10 Mal. Verwenden Sie 30 ml DCM und 30 ml MeOH. Waschen Sie die verbleibenden geschützten Peptide auf dem Harz dreimal nacheinander. mittels TLC oder HPLC Überprüfen Sie die Reinigungsrückstände. Kombinieren Sie das gesamte Filtrat und verdampfen Sie das Lösungsmittel unter reduziertem Druck, um 5 % des Volumens zu hinterlassen. 40 ml Wasser hinzufügen und die Mischung mit Eis-kühlen, um die Ausfällung zu unterstützen. Waschen Sie das Produkt nach der Filtration dreimal mit klarem Wasser und legen Sie es zur Verwendung in eine Vakuumtrockenbox. KOH oder P2O5 Trocknen lassen.
verdünnte Essigsäure:
Verwenden Sie AcOH/TFE/DCM (2:2:6). Behandeln Sie die am Harz hängenden Peptide 2 Stunden lang mit Schneidlösung, filtern Sie das Harz und waschen Sie das Harz dreimal mit Schneidlösung. Fügen Sie dem gemischten Filtrat das 15-fache Volumen n-Hexan hinzu und verdampfen Sie es am Rotationsverdampfer, um überschüssige Essigsäure zu entfernen. Nachfolgend werden die Methoden zur Peptidrückgewinnung detailliert beschrieben.
Anwendbares Harz:2- CTC-Harz